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注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。
產品名稱 | 偏肺病毒PCR檢測試劑盒價格 |
規格 | 50T |
貨號 | LZP7721 |
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
9-氨基吖啶單鹽酸單水合物(>98%,BS)NRMT (D9D6P) Rabbit mAb4,4'-(六氟異)二酞酸酐
9-咔唑(>95%,BR)Lamin B1 (D9V6H) Rabbit mAb葡萄糖酸亞鐵鹽
酰基酰(>99%,BR)EXPAND1/MUM1 (D1Z6Y) Rabbit mAb-酚
溴化酰膽(>98%,BR)Ubiquityl-PCNA (Lys164) (D5C7P) Rabbit mAb2,二-5-基嘧啶
酮肟(>98%,BR)BRD4 (E2A7X) Rabbit mAb2-羥基-6-甲酸
化酰膽(>98%,BR)Phospho-4E-BP1 (Ser65) (D9G1Q) Rabbit mAb-嗎啉基-1,2,5-噻二唑
酸性藍29(>50%,Ind Grade)Securin (D2B6O) Rabbit mAb2-溴-硝基-1-(三氟甲氧基)
酸性藍40(>50%,BS)Phospho-Lamin A/C (Ser22) (D2B2E) XP® Rabbit mAb甲滅酸(甲芬那酸)
酸性品紅6B(>50%,BS)Phospho-Lamin A/C (Ser22) (D2B2E) XP® Rabbit mAb4,6-二氨基-2-甲基巰基嘧啶
吖啶鹽酸鹽(>98%,BS)DNMT3L (E1Y7Q) Rabbit mAb (Mouse Specific)-2-吡啶羧酸甲酯
1-金剛烷甲酸(>99%,BR)HYOU1 Antibody1-辛基-2,二甲基咪唑鹽
B1(>98%,BR)Lmx1B (D1E2) Rabbit mAb2-[2-(甲氧基)]酚
B2(>98%,BR)CHD1L (E1I8C) Rabbit mAb亞甲基環丁
G1(>98%,BR)Phospho-Akt1 (Ser129) (D4P7F) Rabbit mAb噁唑羧酸酯
G2(>98%,BR)Phospho-Aurora A (Thr288)/Aurora B (Thr232)/Aurora C (Thr198) (D13A11) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjuga)4,4'-二氨基二-2,2'-二磺酸
茜素黃R鈉鹽XPF (D3G8C) Rabbit mAb基-甲酸甲酯
D-阿洛糖(>98%,BR)Sec31A (D1G7I) Rabbit mAb2-羥基-5--三氟甲基吡啶
α-葡萄糖縮(>98%,BR)Atg13 (E1Y9V) Rabbit mAb對二甲氨基甲酸異戊酯
骨成型蛋白15(BMP-15/GDF-9B)ELISA試劑盒GLI1 下游轉錄因子Gli1蛋白100 ul
骨保護素(OPG)ELISA試劑盒GLP-1 (7-36) 胰高血糖素樣肽-1100 ul
谷胱甘肽硫轉移酶pi基因(GSTpi)ELISA試劑盒GLP-1 胰高血糖素樣肽-1100 ul
谷胱甘肽還原酶(GR)ELISA試劑盒GLP-1/KG-31 GLP-1100 ul
谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)ELISA試劑盒GLP-1R 胰高血糖素樣肽-1受體100 ul
谷胱甘肽S轉移酶TT(GSTπ)ELISA試劑盒GLP-2 胰高血糖素樣肽-2100 ul
谷胱甘肽(GSH)ELISA試劑盒GLP-2 胰高血糖素樣肽-2100 ul
谷氨酰轉移酶6(IgM)ELISA試劑盒GLUT1 葡萄糖轉運蛋白120 ul
谷氨酰轉移酶2(IgG)ELISA試劑盒GLUT2 葡萄糖轉運蛋白2100 ul
偏肺病毒PCR檢測試劑盒價格雙特異性磷酸酶22抗體Sulfaguanidine中文名:磺胺脒別名:分子式:C7H10N4O2S
脫氧核糖核酸酶γ抗體Gatifloxacin Mesylate中文名:甲磺酸加替沙星別名:分子式:C20H26FN3O7S
DNA斷裂因子抗體(蛋白酶激活脫氧核糖核酸酶)Flumequine sodium中文名:氟甲喹鈉別名:分子式:C14H11FNNaO3
死亡相關轉錄因子1抗體Bromhexine hydrochloride中文名:鹽酸溴己新別名:分子式:C14H21Br2ClN2
脫氧核糖核酸酶1抗體Sarafloxacin hydrochloride中文名:鹽酸沙拉沙星別名:分子式:C20H18ClF2N3O3