產品名稱：冠狀動脈平滑肌細胞
英文簡稱：HCASMC 細胞

貨號：LZ-X969706
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經過優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C。或者，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細胞計數板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
   5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：
     盡管經測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個月內推薦4℃保存，并適當注意避免反復凍融。
     如果有細菌或真菌污染，會嚴重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數量增加。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶，需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導致染色失敗。
     熒光物質均易發(fā)生淬滅，在進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細胞儀檢測時，如果發(fā)現Annexin V-FITC單獨染色時出現了過多的PI假陽性細胞，并且通過調整相關設置和參數也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞。
     需自備PBS。
     本產品于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
     為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
前杯莧甾酮Peiminine；貝母素乙Bradford大量蛋白質濃度定量試劑盒

茜素Cabazitaxel；卡巴他賽Bradford大量蛋白質濃度定量試劑盒

羌活Gefitinib；吉非替尼Bradford蛋白質濃度定量試劑盒

強力霉素Madecassic acid；羥基積雪草酸Bradford蛋白質濃度定量試劑盒

羥基紅花黃色素ASodium Houttuyfonate；魚腥草素鈉BRDU（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）

羥基積雪草苷Loganin；馬錢苷BrdU標記法繁殖比色法定量檢測試劑盒

羥基積雪草酸Psoralidin；補骨脂定BrdU標記法繁殖流式儀檢測試劑盒

羥基酪Cyanidin-3-O-Rutinoside；矢車菊素-3-O-蕓香糖苷BrdU標記法繁殖流式儀檢測試劑盒

羥基酪醋酸酯Naringin dihydrochalcone；柚皮苷二氫查爾酮BrdU標記法繁殖熒光定量檢測試劑盒

羥基檸檬酸Cardamomin；豆蔻明BrdU標記法繁殖熒光顯微鏡檢測試劑盒

羥基茜草素1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl/DPPH；1,1-二苯基-2-苦基肼BrdU標記法載玻片繁殖NBT顯色檢測試劑盒

羥基吳茱萸堿Pelargonidin-3-O-glucoside；天竺葵素-3-O-葡萄糖苷BrdU標記法載玻片繁殖熒光顯微鏡檢測試劑盒

羥基芫花素Streptozocin；鏈脲佐菌素BrdU標記法組織冰凍切片繁殖NBT顯色檢測試劑盒

喬松素Dioscin；薯蕷皂苷/重樓皂苷ⅢBrdU標記法組織冰凍切片繁殖熒光顯微鏡檢測試劑盒

蕎麥堿Harpagoside；哈巴俄苷BrdU標記法組織石蠟切片繁殖NBT顯色檢測試劑盒
HCASMC 細胞因子信號傳導抑制蛋白3抗原1,8-桉葉素Human

超氧化物歧化酶1抗原1-羥-3,4,5-三氧山（標準品）Human

超氧化物歧化酶2抗原10-姜酚（標準品）Human

生長抑素抗原10-羥癸（標準品)Human

胚胎干關鍵蛋白10-羥癸烯,10-HDA(標準品)Human

SP1轉錄生長因子抗原10-羥喜樹(標準品)Human

富含半胱氨的性分泌蛋白抗原10-脫乙酰巴卡亭(標準品)Human, Mouse

血清應答因子抗原11(α)氧柴胡皂苷FHuman

固調節(jié)元件結合蛋白1抗原11-O-羅漢果苷V(標準品)Human, Mouse